RECONOCIMIENTO DE PRÓTIDOS

MATERIALES

- Vasos de precipitados

- Pipetas

- Tubos de ensayo

- Gradilla

- Mechero

- Solución de HCl concentrado

- Alcohol etílico

- Solución de S04Cu al 1 %

- NaOH al 200¡&

- Clara de huevo o leche

- Solución de albúmina alI -2%

1. COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

FUNDAMENTO

Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70°C o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.

La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes . indicados que al actuar sobre la proteína la desordenan por destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria.

TÉCNICA

1. Colocar en tres tubos de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo (puede diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla espesa) o 2-3ml de leche.

2. Calentar uno de los tubos al baño María, añadir a otro 2-3ml de HCl concentrado y al tercero 2 o 3ml de alcohol etilico.

3. Observar los resultados.

2. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)

FUNDAMENTO

Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos.

El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(lI) y sosa, y el Cu, en un medio fuertemente alca1ino, se coordina con los enlaces peptídico formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

TÉCNICA

1. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solución de albúmina al 1-2%.

2. Añadir 4-5 gotas de solución de S04CU a11 %.

3. Añadir 31111 de solución de NaOH al 20%.

4. Agitar para que se mezcle bien.

5. Observar los resultados.

CUESTIONES

1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de In clara de huevo?

2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?

3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?

4. ¿Qué coloración da la reacción del Biurct?

5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Hiuret'l

6. Si se realiza la reacción del Bimet sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?

RECONOCIMIENTO DE GLÚCIDOS

MATERIALES

- Tubos de ensayo

- Gradilla

- Pinzas

- Mechero

- Pipetas

- Solución de Lugol

- Solución de Fehling A y B

- Solución alcalina (sosa, potasa, bicarbonato, etc.)

- CIH diluido

- Soluciones al 5% de glucosa, maltosa, lactosa, fructosa, sacarosa y almidón.

1. ESTUDIO DE AZÚCARES REDUCTORES

FUNDAMENTO

Los monosacáridos y la mayoría de los disacáridos poseen poder reductor, que deben al grupo carbonilo que tienen en su molécula. Este carácter reductor puede ponerse de manifiesto por medio de una reacción redox llevada a cabo entre ellos y el sulfato de Cobre (TI). Las soluciones de esta sal tienen color azul. Tras la reacción con el glúcido reductor se forma óxido de Cobre (1) de color rojo. De este modo, el cambio de color indica que se ha producido la citada reacción y que, por lo tanto, el glúcido presente es reductor.

TÉCNICA

1. Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solución de glucosa, maltosa, lactosa fructosa o sacarosa (según indique el profesor).

1. Afiadir lml de solución de Feh1ing A (contiene CuS04) y lml de Feh1ing B (lleva NaOH para alcalinizar el medio y permitir la reacción)

2. Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan.

3. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo y será negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso.

4. Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prácticas con las distintas muestras de glúcidos.

2. HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA

FUNDAMENTO

La sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres por lo que carece de poder reductor y la reacción con el licor de Feh1ing es negativa, tal y como ha quedado demostrado en el experimento 1. Sin embargo, en presencia de CIH y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se descompone en los monosacáridos que la forman, glucosa y fructosa, que sí son reductores. La prueba de que se ha verificado la hidrólisis se realiza con el licor de Fehling y, si el resultado es positivo, aparecerá un precipitado rojo. Si el resultado es negativo, la hidrólisis no se ha realizado correctamente y si en el resultado final aparece una coloración verde en el tubo de ensayo se debe a una hidrólisis parcial de la sacarosa.

TECNICA

1. Tomar 3ml de solución de sacarosa y añadir 10 gotas de ClH diluido

2. Calentar a la llama del mechero durante unos 5 minutos.

3. Dejar enfriar .

4. Neutralizar añadiendo 3ml de solución alcalina.

5. Realizar la prueba de Fehling como se indica en el experimento l.

6. Observar y anotar los resultados.

3. INVESTIGACIÓN DE POLISACÁRIDOS (ALMIDÓN)

FUNDAMENTO

El almidón es un polisacárido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido no a una reacción química sino a la adsorción o fijación de yodo en la superficie de la molécula de amilosa, lo cual sólo ocurre en fHo. Como reactivo se usa una solución denominada lugol que contiene yodo y yoduro potásico. Como los polisacáridos no tienen poder reductor, la reacción de Fehling da negativa.

TÉCNICA

1. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de la solución de almidón.

2. Añadir 3 gotas de la solución de lugol.

3. Observar y anotar los resultados.

4. Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color.

5. Enfriar el tubo de ensayo al grifo y observar cómo, a los 2-3 minutos, reaparece el color azul.